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浅谈液相色谱柱的使用和维护保养!

2022-03-12 14:01:15

液相色谱柱由柱管、压帽、卡套(密封环)、筛板(滤片)、接头、螺丝等组成。柱管多用不锈钢制成,压力不高于70 kg/cm2 时,也可采用厚壁玻璃或石英管,管内壁要求有很高的光洁度。为提高柱效,减小管壁效应,不锈钢柱内壁多经过抛光。也有人在不锈钢柱内壁涂敷氟塑料以提高内壁的光洁度,其效果与抛光相同。还有使用熔融硅或玻璃衬里的,用于细管柱。下面气相色谱仪厂家为您介绍液相色谱柱如何维护与保养:

液相色谱柱使用前应仔细阅读说明书,注意色谱柱的使用温度、pH值范围、所用缓冲盐的种类等。

1、新色谱柱在使用前,先用纯甲醇在254nm波长下处理,直至基线冲平为止,然后用甲醇:水=10:90(V:V)冲柱子,直到基线冲平为止。

2、一般反相色谱柱使用方法:先以甲醇:水=10:90(V:V)冲洗柱子45分钟,再换上流动相平衡45分钟,根据基线情况进样(基线漂移不符合要求时应延长平衡时间),分析样品完毕,流动相继续20分钟(或20分钟又上),使用缓冲盐(或含盐)作流动相,应用不含缓冲盐(作同量的水代替缓冲盐)的流动相冲洗色谱柱,使色谱柱中的盐完全洗掉。再换上甲醇:水=10:90(V:V)冲洗柱子45~60分钟,然后再用100%甲醇冲40分钟,再放置保存。

注意:不能用纯有机溶剂直接冲洗色谱柱,防止盐析出,堵塞色谱柱或仪器管路,而使色谱柱报废。

3、一般正相色谱柱使用方法:zui常用的流动相是水和乙腈混合物。先用乙腈:水=85:15(V:V)冲洗柱子45分钟,再换上流动相平衡45分钟,根据基线情况进样(基线漂移严重应延长平衡时间),分析样品完毕,流动相继续20分钟(或20分钟以上),再换上乙腈:水=85:15(V:V)冲洗柱子45~60分钟,放置保存。

4、特殊色谱柱(手性柱或异构体柱子)使用时,除仔细阅读说明书外,还需向所购买单位详细咨询使用方法及注意事项,确认无误后,方可使用。

5、在替换溶剂时,应确保系统和色谱柱中的溶剂与新溶剂互溶。如果两种溶剂互溶性和物理性质未知,可以把两种溶剂倒在烧杯中观察,以避免直接进入HPLC系统可能出现不互溶的问题。

液相色谱柱

6、对于反相柱,长期保存色谱柱时应将柱内充满乙腈或甲醇,柱接头要拧紧,防止溶剂挥发干燥。禁止将缓冲溶液留在柱内静置过夜或更长时间。正相柱可以储存于严格脱水后的纯正已烷中,储存的温度按照说明书要求储存。

7、柱子在装卸、更换时,动作要轻,接头拧紧要适度。必须防止较强的机械振动,以免柱床产生空隙。

8、避免压力和温度的急剧变化及任何机械震动。温度的突然变化或者使色谱柱从高处掉下都会影响柱内的填充状况;柱压的突然升高或降低也会影响柱内填料状态,因此在调节流速时应该缓慢进行。

9、应逐渐改变溶剂的组成,特别是反相色谱柱中,不应直接从有机溶剂改变为全部是水,反之亦然。

10、如使用柱温控制装置时,应注意在通入流动相后才能升温。温度波动会引起色谱峰漂移并产生多种影响。使用色谱柱时,保持柱温恒定非常重要。填料粒度不同也是选择和考虑色谱柱使用温度的因素之一。粒径小于5μm的填料在温度升高时柱床更容易塌陷,使柱效下降。如果运用得当,柱温也是改善色谱分离的一个有效办法,降温可以增加保留时间、提高选择性和分离度等,升温则相反。

11、一般色谱柱不能反冲,只有生产者指明该柱可以反冲时,才可以反冲。

12、色谱柱使用过程中,如果压力升高,一种可能是烧结滤片被堵塞,这时应更换滤片或将其取出进行清洗;另一种可能是大分子进入柱内,使柱头被污染;如果柱效降低或色谱峰变形,则可能柱头出现塌陷,死体积增大。


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